發(fā)布時(shí)間： 2020-10-23 點(diǎn)擊次數(shù)： 3416次
PCR儀是利用DNA聚合酶用于擴(kuò)增特定的DNA的片段，對(duì)特定基因做體外大量合成，可以將一段基因復(fù)制為原來的百億至千億倍。利用酶融合技術(shù)，梯度PCR儀可獲得更快、更好結(jié)果;其可靈活配備96和384孔加熱模塊并具優(yōu)異的梯度功能，用于加速實(shí)驗(yàn)方案開發(fā)。7"高分辨率觸摸屏，配備智能向?qū)В瑤椭鶕?jù)實(shí)驗(yàn)室條件創(chuàng)建適合的PCR實(shí)驗(yàn)方案。
PCR儀的擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶，這是怎么回事呢？
1.引物用量偏大，引物的特異性不高。應(yīng)調(diào)換引物或降低引物的使用量。
2.循環(huán)的次數(shù)過多。適當(dāng)增加模板的量，減少循環(huán)次數(shù)。
3.酶的用量偏高或酶的質(zhì)量不好，應(yīng)降低酶量或調(diào)換另一來源的酶。
4.退火溫度偏低，退火及延伸時(shí)間偏長。應(yīng)提高退火溫度，減少變性與延伸時(shí)間，也可采用二種溫度的PCR擴(kuò)增。以2度為梯度設(shè)計(jì)梯度PCR反應(yīng)優(yōu)化退火溫度。
5.樣品處理不當(dāng)。
6.Mg2+濃度偏高，因適當(dāng)調(diào)整Mg2+使用濃度。
7.若為PCR試劑盒，也可能時(shí)試劑盒本身質(zhì)量有問題。
8.復(fù)制提前終止。使用非熱啟動(dòng)的聚合酶時(shí)常有發(fā)生。冰上準(zhǔn)備反應(yīng)體系或采用熱啟動(dòng)聚合酶。
9.反應(yīng)緩沖液未*融化或未充分混勻。確保反應(yīng)緩沖液融化*并*混勻。
10.引物特異性差。檢查引物特異性或重新設(shè)計(jì)引物。
11.引物量過多。減少反應(yīng)體系中引物的用量。
12.模板量過多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)＜50ng，而基因組DNA則應(yīng)＜200ng。
13.外源DNA污染。確保操作的潔凈。
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